康宁生命科学 (吴江) 有限公司
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培养基选择及常见问题
人阅读 发布时间:2020-01-19 10:08
本期为大家带来培养基选择及常见问题,满满的干货,务必仔细阅读啦
培养基选择及FAQ⚑ 如何选择合适的培养基?
点击以下链接获取常见细胞系及培养基推荐;另外可以根据具体的细胞系名称在ATCC官网搜索相应的细胞系,可以获得推荐的培养基使用信息。
⚑ 如何获取培养基的PH值?
pH 6.8-7.8为细胞生长的最佳 pH条件。通常康宁培养基的pH值出厂质检标准为7.2±0.2@25℃,具体请参考各产品相应批次的质检报告,包含质检标准和测试数值。
⚑ 培养基的储存温度如何?如何查询有效期?
通常培养基的储存温度为2-8℃,可参考瓶身标签或质检文件。康宁培养基根据其成分不同,相应效期也不同,液体培养基通常可保存12-18个月,培养基粉末通常可保存36个月,具体有效期请参考产品标签或相应批次的质检文件。
⚑ 培养基中为什么加入酚红?何时选择不含酚红的培养基?
在培养基中通常会添加酚红作为酸碱指示剂(中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色)。但在某些应用中,酚红的颜色会起到干扰作用,如流式细胞仪检测;同时,酚红还是类固醇类激素类似物,如果使用者的研究是激素敏感的实验,如雌激素,应该避免使用含酚红的培养基。
⚑ 什么是高糖/低糖/无糖DMEM培养基,如何区分及选择?
葡萄糖(Glucose)是细胞生长所需的主要能量来源。DMEM培养基为Eagle基础培养基改进部分成分含量而成。康宁提供葡萄糖含量不同的DMEM培养基。
最初的 DMEM培养基中葡萄糖浓度为1g/L,现称为低糖型DMEM(如10-014),适合培养多种哺乳动物细胞。
据ATCC推荐,另有一些细胞系(如一些生长速度较快的肿瘤细胞系等)适合使用高糖型 DMEM,其葡萄糖浓度为 4.5 g/L(如10-013、10-017、10-101、10-102等)。
使用无糖DMEM培养基(如17-207)的主要目的是,通过控制细胞的能量来源,研究细胞的代谢过程或葡萄糖利用效率。
由于DMEM培养基不含蛋白、脂类或生长因子,因此在实际使用时需要添加剂(例如最常用的10%FBS)。此外,DMEM使用碳酸氢钠缓冲系统(3.7 g/L),因此需要5–10% CO2的培养环境以维持pH生理环境。在配置干粉培养基时,也请不要忘记自行添加碳酸氢钠(3.7 g/L)。
⚑ 为什么有些培养基需要补加L-谷氨酰胺(L-glutamine)?使用时有何建议?
谷氨酰胺在细胞增殖过程中必不可少,是细胞的重要能量来源,参与蛋白质的合成,也为合成核酸提供碳源。
L-谷氨酰胺不稳定,随培养基保存时间延长而缓慢降解,降解产物氨对细胞有毒性。
康宁培养基既提供已添加谷氨酰胺的型号,也提供无L-谷氨酰胺型号,使用者可以自行添加。
建议:避免对含谷氨酰胺的培养基长时间水浴加热;选择不含谷氨酰胺的培养基(康宁货号以15-/17-/90-开头),使用前需添加 L- 谷氨酰胺;您亦可选择稳定的谷氨酰胺替代物glutaGRO™(康宁货号25-015-CIR)。
⚑ Cellgro液体培养基可以高温高压灭菌吗?
液体培养基一般不可以进行高温高压灭菌。如果高温高压灭菌,培养基里的葡萄糖、L-谷氨酰胺、碳酸盐会降解。
⚑ 以10-040为例,不同字母后缀的货号10-040-CM,10-040-CMR,10-040-CV,10-040-CVR和10-040-CVRC有何区别?产品是一样的吗?
后缀为-CM 代表产品规格为1L,而-CV代表产品规格为500ml;其他后缀由于产地和地方政策的不同会有不同标记,只要货号前面数字一致,产品即为同一配方。
⚑ 液体培养基与干粉培养基的区别?
康宁提供液体培养基和干粉培养基。液体培养基无需配制或过滤,可直接使用;批次间稳定性高。干粉培养基性质稳定,效期较长;使用前需自行配制,并需要单独添加碳酸氢钠(pH缓冲剂);需过滤,引入额外操作且消耗滤器;单价相对液体培养基低。
⚑ 康宁除了常用的经典培养基外,还有其他什么特殊培养基吗?
康宁提供一系列特殊培养基,例如无血清培养基,CHO细胞培养基(40-200),杂交瘤细胞培养基(40-215,40-101,40-102),昆虫培养基(13-402、13-410)等。
⚑ 康宁经典培养基的质量体系包括哪些?
我们位于美国的生产工厂遵守cGMP (current Good Manufacturing Practices)管理,持有ISO 13485:2016 (医疗器械质量管理体系 ) 的认证,并且为美国FDA注册工厂。使用注射用等级用水WFI(Water for Injection),产品洁净标准达SAL 10-3,原位蒸气清洗CIP (clean-in-place) and SIP(steam-in-place)确保无菌装填。
⚑ 康宁培养基可应用于临床研究吗?
不可以,我司培养基仅供科学研究以及后续生产使用,不可用于任何体外诊断或临床研究。
为了更有效地帮助大家了解我们的产品、改善产品选择流程,同时解决可能出现的问题,我们技术部小姐姐特地针对咨询和疑问较多的产品,整理了一系列常见问题解答(FAQ)
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