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细胞难伺候,你真的会选培养基吗?

人阅读 发布时间:2020-06-11 15:44

生命科学技术的发展离不开基因工程技术、细胞工程技术和酶工程等技术的发展,其中动物细胞培养技术在生物医药领域、细胞工程和酶工程领域中都必不可少。所以,培养细胞就成了科研之中一个基础又重要的工作。

培养细胞的重要环节有很多,其中很重要的一步就是为细胞选择适合的生长环境,为其选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。细胞培养基是供给细胞营养、维持细胞生长和增殖的多种营养物质的混合物,种类一般包括经典 / 基础培养基、无血清培养基以及化学成分确定的培养基等。这其中又以经典 / 基础培养基最为常用。经典 / 基础培养基属于合成培养基,是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基,其主要成分有氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其他辅助成分,比如 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 ,这些都是应用非常广泛的经典 / 基础细胞培养基。
在确定培养基种类后,还会遇到培养基有不同分型的情况。那么对于经典培养基中不同成分的作用及选择原则又是什么呢?请往下看~


葡萄糖(Glucose)
作用:细胞生长所需的主要能量来源
如何选择不同葡萄糖含量的培养基?

   · 最初的 DMEM 中,葡萄糖浓度为 1 g/L,现在称其为低糖型 DMEM,适合培养多数哺乳动物细胞
   · 高糖型 DMEM 中的葡萄糖浓度为 4.5 g/L,适合生长速度快,附着性较差的肿瘤细胞
   · 使用无糖培养基的主要目的是,通过控制细胞的能量来源,研究细胞的代谢过程或葡萄糖利用效率

HEPES
作用:pH 缓冲剂

   · 是一种氢离子缓冲剂,其作用不依赖于 CO2
   · 在一定范围内对细胞无毒性作用,能较长时间控制恒定的 pH 范围,保证细胞良好生长
   · 部分细胞对酸碱度的变化非常敏感,建议使用 HEPES
   · 根据需要,非必需


L- 谷氨酰胺(L-glutamine)
作用:L- 谷氨酰胺是一种氨基酸,细胞的重要能量来源,参与蛋白质的合成,也为合成核酸提供碳源
存在的不足:

   · L-谷氨酰胺不稳定,在中性的水溶液中会自发降解
   · 降解产物氨对细胞有毒性
   · 对氨敏感的细胞(如干细胞和原代细胞等)或培养环境(高密度反应器,无补料的长期培养)不推荐含 L- 谷氨酰胺的培养基
解决方案:
   · 选择不含谷氨酰胺的培养基,在使用前再添加 L- 谷氨酰胺,并尽快用完
   · 选择稳定的谷氨酰胺替代物,如 glutaGRO™

酚红(Phenol red)
作用:pH 值的指示剂(中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色)
何时选择不含酚红的培养基?

   · 培养干细胞或细胞克隆时倾向于不加酚红
   · 酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)
   · 酚红的颜色会干扰流式检测,不建议使用含酚红的培养基制备细胞样品(通常用 PBS)

碳酸氢钠(Sodium bicarbonate)
作用:pH 缓冲剂

   · pH 6.8-7.8 为细胞生长的最佳 pH 条件
   · 多数培养基利用碳酸氢钠进行缓冲
   · 碳酸氢钠的缓冲需要 CO2
     1. 高碳酸氢钠 (1.5-3.7g/L) 需要 5-10% CO2 培养
     2. 低碳酸氢钠 (0.35g/L) 不需要 CO2 培养
   · 干粉培养基在配制时需要单独添加

丙-酮酸钠(Sodium pyruvate)
作用:能量来源

   · 丙-酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源
   · 葡萄糖不足的时候,细胞可以代谢丙-酮酸钠
   · 保证细胞更好地生长
   · 根据需要,非必需组分

除了培养基,缓冲盐溶液在细胞培养过程中也至关重要。缓冲盐溶液被制成至生理 pH 和盐浓度,它们可以单独使用,也可以与其他试剂一起用于清洗组织和细胞。 缓冲盐溶液通常包括钠,钾,钙,镁和氯化物。盐溶液在组织培养中发挥着非常重要的作用。盐溶液的基本功能,以维持培养基中的 pH 值和渗透压平衡,并为细胞提供水和必需的无机离子。

选择高品质的培养基,对于细胞培养而言,不仅可以确保您实验数据的稳定性和可重复性,更能节约宝贵的实验时间和精力。选择培养基时还需关注培养基质量测试报告,包括无菌测试、支原体检测、PH、渗透压、内毒素以及细胞生长实验等。

康宁细胞培养基,每个批次均通过高标准的质量测试。康宁进口细胞培养基严格采用高品质的原材料和试剂,使用注射级用水配制,每批都检测支原体,同时确保其极低的内毒素水平,每个批次的检测报告可以上康宁官网下载。同时,康宁也提供部分种类的国产培养基,执行与进口培养基相同的质检标准,保证细胞培养性能。


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