基于Corning Videodrop的慢病毒载体物理滴度监测质量控制

近年来，病毒载体在细胞和基因治疗的应用中展现出巨大的潜力。根据Wiley数据库，全球已有超过3500个基于病毒载体的临床试验，其中慢病毒（LV）载体相关的约占10%。

 

为了确保慢病毒载体的生产质量，必须遵循良好生产规范（GMP）进行生产、纯化和质量控制。Corning Videodrop作为一种快速测量溶液中纳米颗粒大小和物理滴度的工具，可以有效地整合到慢病毒质量控制过程中。在这里我们通过软件与验证实验的结果，评估Corning Videodrop在GMP生产中的表现。

 

1. 软件

在药品生产中使用的计算机系统必须根据GMP附录11的要求进行验证。Corning Videodrop配备了受管环境许可软件（qvirCLS），可帮助慢病毒生产商进行计算机系统验证。

 

 

 

2. 方法验证

本研究采用IXAKA生产的慢病毒载体。我们根据ICH Q2的要求，选择的样本包括澄清后的收获样本（LV Harvest）和完全纯化后的样本（LV Final product），然后利用Corning Videodrop测定样品，从而评估线性（Linearity）、精密度（Precision）和准确性（Accuracy）等关键参数。

表1. 验证方案总结

 

线性响应

ICH Q2将线性响应定义为（在给定范围内）测试结果与样本中分析物浓度成正比的能力。Corning Videodrop测得的LV Harvest和LV Final product结果都具有良好的线性关系，相关系数（R²）均高于0.98，斜率均超过0.9（图1）。

图1. 线性参数表评估

 

精密度

ICH Q2将精密度定义为在相同条件下对同一均质样品进行多次取样所获得的测量值之间的一致性。

 

我们对LV Harvest和LV Final product选定一个稀释因子进行重复性评估（图2），结果显示变异系数（CV）均低于12%（图3），体现了Corning Videodrop的精密度优势。

图2. 精密度评估

 

图3. 变异系数（CV）计算

 

准确度

ICH Q2将准确度定义为测得值与公认的真实值或参考值之间的接近程度。

Corning Videodrop对LV Final product的六个稀释浓度进行测量，回收率均在90%至110%之间（图4）。

图4. 准确度估算

 

我们还比较了p24 ELISA和Corning Videodrop测得的样品浓度，两者具有高度一致的线性关系（R²=0.97）（图5）。这些结果证实了Corning Videodrop作为不同批次慢病毒载体物理滴度检测指标的准确性。

图5. 比较p24 ELISA和Corning Videodrop在LV生产过程不同步骤的样品测量浓度

 

结论

Corning Videodrop在慢病毒载体生物生产中的物理滴度分析中展现出极大的价值。其软件和硬件均适合在GMP环境中使用，且在ICH Q2指导下的验证特性表现良好。Corning Videodrop可以有效地融入慢病毒载体的生产过程中，为临床试验申请的IMPD的质量部分和市场授权申请的CTD的质量部分提供支持。

 

参考文献

Corning® Videodrop: A Suitable System for In-process Controls of Lentiviral Vectors in GMP Environment (CLS-AN-819)