- 移动端
康宁生命科学 (吴江) 有限公司品牌商
9 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 1
- 2
- 1
推荐产品
公司新闻/正文
Axygen Biokit常见问题（上）
3186 人阅读发布时间：2020-01-19 10:10
⚑ 目前Axygen Biokit试剂盒有哪些？如何选择？
⚑ Axygen柱法抽提试剂盒，哪些组分可以单独购买，对应的货号是？
*上述货号后续可能会有变更，请购买前确认
⚑ Axygen柱法质粒DNA抽提试剂盒，适用哪类细菌质粒抽提，适用的质粒片段大小是？
适用于革兰氏阴性细菌。若是革兰氏阳性细菌，可尝试在培养体系中加入L-threonine 弱化细胞壁，然后用溶菌酶预处理细胞壁后使用。但该试剂盒不含溶菌酶，且没有验证过从革兰氏阳性细菌中抽提质粒，客户需要自行验证确定是否适用。
该试剂盒推荐用于不超过10kb质粒片段抽提。若片段大小超过该范围，抽提效率会受到影响，请客户测试确定是否适用。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，一般可获得多少质粒？
质粒获得量受多种因素影响，如菌液用量，菌液质量，质粒拷贝数等。
从试剂盒本身的角度看，质粒小量试剂盒和高通量试剂盒每管可纯化多至20ug 质粒DNA，质粒中量试剂盒可纯化多至100ug质粒DNA, 质粒大量试剂盒可纯化多至500ug 质粒DNA。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，质粒得率低甚至抽不到质粒，原因分析及改善建议？
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，回收质粒用于酶切，效果不好，原因分析及改善建议？
· 抽提的质粒中含有盐（EDTA, SDS），蛋白，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次，最后一次buffer W2清洗时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
· 核酸酶污染引起质粒降解;建议在抽提过程中，涉及到的耗材确保是DNase-free。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，抽提到的质粒，在电泳图上看到3-4条带，可能的原因是什么？如何改善？
一般情况下，抽提到的质粒可能有三种形式：超螺旋闭环DNA（cccDNA），超螺旋开环DNA（ocDNA）和线性DNA。在电泳结果中，如果有更多条带出现，也可能是污染了基因组DNA。在裂解及中和过程中，避免裂解时间过长，剧烈震荡等破坏基因组DNA的操作。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，质粒DNA纯度偏低，原因分析及改善建议？
目前，一般常用两个指标衡量质粒DNA纯度，即：A260/A280和A260/A230。
理论上讲，纯的质粒DNA的A260/A280=1.8，高质量质粒DNA，其A260/A280一般在1.7-1.9之间。
若A260/A280低于1.7，考虑可能质粒中有蛋白质，酚类或其他在280nm 处有较强吸收峰的物质。建议减少菌量，确保抽提质粒过程中菌液被充分重悬，裂解及中和。
若A260/A280高于1.9，考虑可能是质粒中有RNA污染；建议确保RNase 已加入buffer S1，并且没有因过期或存放不当而导致RNase 酶活性降低或失效。
高质量质粒DNA，其A260/A230一般不低于1.5。
若A260/A230偏低，考虑可能有如下污染：糖类，胍类，酚类等。
若A260/A230特别高，如3或以上，考虑可能有如下污染：背景或测试容器不洁净导致OD读数异常，背景孔中的buffer应和溶解质粒DNA的buffer有相同的PH和盐离子浓度。
改善建议：洗脱时延长离心时间，增加洗涤次数。【William W. Wilfinger, Karol Mackey, and Piotr Chomczynski,Effect ofpH and Ionic Strength on the Spectrophotometric Assessment of Nucleic AcidPurity: BioTechniques 22:474-481(March 1997)】
此外，上述比值仅供参考，有文献认为， OD值不在最佳范围内，并不意味着该DNA不适用于后续实验。【Ramos-Gómez et al., 2014, Costa et al.,2010; Muzzalupo et al., 2007; publications about the extraction of DNA fromvegetable oils】
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的基因组DNA量偏低，可能的原因及改善建议？
· 抽提基因组DNA所用材料保存不当或反复冻融，导致材料中基因组DNA被破坏降解；建议尽量选择新鲜材料，不能马上处理的样本应及时按照相关SOP低温保存，避免反复冻融。
· 样本使用量过多，导致裂解不充分；建议调整样本用量，植物组织应在液氮中充分研磨。
· 洗脱效率不高；建议确保buffer W2中加入相应体积的乙醇(95%-100%)，最后一次洗脱后，确保制备柱没有被过度抽干，确保洗脱液的PH合适（PH7.0-8.5），洗脱液加入制备柱膜正中间并均匀覆盖制备柱膜表面。洗脱液预热到65℃，加入制备柱膜上室温放置2-5分钟，可提高洗脱效率。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA A260/A280比值异常，可能的原因分析及改善建议？
· 若A260/A280偏低，考虑可能有蛋白质，酚类或其他在280nm处有较强吸收峰的物质；建议调整样本用量，确保抽提过程中，样本被充分裂解。
· 若A260/A280偏高，考虑可能有RNA污染；建议确保抽提过程中按试剂盒protocol使用RNA酶，确保使用的RNA酶没有因过期或存放不当导致活性降低或失效。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA有降解，可能的原因分析及改善建议？
· 抽提基因组DNA所用材料保存不当或反复冻融，导致基因组DNA破坏或部分降解；建议尽量选择新鲜材料，不能马上处理的样本应及按照相关SOP低温保存和运输，避免反复冻融。
· 内源性核酸酶引起基因组DNA被降解；建议研磨过程中补充液氮，裂解液中加入核酸酶抑制剂。
· 操作过于激烈，导致DNA被机械损伤；建议在混合及裂解过程中，避免长时间过度激烈操作。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA酶反应效果不好，可能的原因分析及改善建议？
· DNA纯度偏低，请参考A260/A280值异常的改善建议。
· DNA中含有盐分，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次或适当增加洗涤次数，最后一次buffer W2洗涤时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提过程中，制备膜孔被堵住，可能的原因分析及改善建议？
· 样本过多，建议减少样本用量；
· 样本裂解研磨不充分，确保样本充分研磨和裂解。
⚑ Axygen柱法抽提试剂盒，哪些组分可以单独购买，对应的货号是？
*上述货号后续可能会有变更，请购买前确认
⚑ Axygen柱法质粒DNA抽提试剂盒，适用哪类细菌质粒抽提，适用的质粒片段大小是？
适用于革兰氏阴性细菌。若是革兰氏阳性细菌，可尝试在培养体系中加入L-threonine 弱化细胞壁，然后用溶菌酶预处理细胞壁后使用。但该试剂盒不含溶菌酶，且没有验证过从革兰氏阳性细菌中抽提质粒，客户需要自行验证确定是否适用。
该试剂盒推荐用于不超过10kb质粒片段抽提。若片段大小超过该范围，抽提效率会受到影响，请客户测试确定是否适用。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，一般可获得多少质粒？
质粒获得量受多种因素影响，如菌液用量，菌液质量，质粒拷贝数等。
从试剂盒本身的角度看，质粒小量试剂盒和高通量试剂盒每管可纯化多至20ug 质粒DNA，质粒中量试剂盒可纯化多至100ug质粒DNA, 质粒大量试剂盒可纯化多至500ug 质粒DNA。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，质粒得率低甚至抽不到质粒，原因分析及改善建议？
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，回收质粒用于酶切，效果不好，原因分析及改善建议？
· 抽提的质粒中含有盐（EDTA, SDS），蛋白，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次，最后一次buffer W2清洗时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
· 核酸酶污染引起质粒降解;建议在抽提过程中，涉及到的耗材确保是DNase-free。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，抽提到的质粒，在电泳图上看到3-4条带，可能的原因是什么？如何改善？
一般情况下，抽提到的质粒可能有三种形式：超螺旋闭环DNA（cccDNA），超螺旋开环DNA（ocDNA）和线性DNA。在电泳结果中，如果有更多条带出现，也可能是污染了基因组DNA。在裂解及中和过程中，避免裂解时间过长，剧烈震荡等破坏基因组DNA的操作。
⚑ Axygen柱法抽提质粒试剂盒，质粒DNA纯度偏低，原因分析及改善建议？
目前，一般常用两个指标衡量质粒DNA纯度，即：A260/A280和A260/A230。
理论上讲，纯的质粒DNA的A260/A280=1.8，高质量质粒DNA，其A260/A280一般在1.7-1.9之间。
若A260/A280低于1.7，考虑可能质粒中有蛋白质，酚类或其他在280nm 处有较强吸收峰的物质。建议减少菌量，确保抽提质粒过程中菌液被充分重悬，裂解及中和。
若A260/A280高于1.9，考虑可能是质粒中有RNA污染；建议确保RNase 已加入buffer S1，并且没有因过期或存放不当而导致RNase 酶活性降低或失效。
高质量质粒DNA，其A260/A230一般不低于1.5。
若A260/A230偏低，考虑可能有如下污染：糖类，胍类，酚类等。
若A260/A230特别高，如3或以上，考虑可能有如下污染：背景或测试容器不洁净导致OD读数异常，背景孔中的buffer应和溶解质粒DNA的buffer有相同的PH和盐离子浓度。
改善建议：洗脱时延长离心时间，增加洗涤次数。【William W. Wilfinger, Karol Mackey, and Piotr Chomczynski,Effect ofpH and Ionic Strength on the Spectrophotometric Assessment of Nucleic AcidPurity: BioTechniques 22:474-481(March 1997)】
此外，上述比值仅供参考，有文献认为， OD值不在最佳范围内，并不意味着该DNA不适用于后续实验。【Ramos-Gómez et al., 2014, Costa et al.,2010; Muzzalupo et al., 2007; publications about the extraction of DNA fromvegetable oils】
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的基因组DNA量偏低，可能的原因及改善建议？
· 抽提基因组DNA所用材料保存不当或反复冻融，导致材料中基因组DNA被破坏降解；建议尽量选择新鲜材料，不能马上处理的样本应及时按照相关SOP低温保存，避免反复冻融。
· 样本使用量过多，导致裂解不充分；建议调整样本用量，植物组织应在液氮中充分研磨。
· 洗脱效率不高；建议确保buffer W2中加入相应体积的乙醇(95%-100%)，最后一次洗脱后，确保制备柱没有被过度抽干，确保洗脱液的PH合适（PH7.0-8.5），洗脱液加入制备柱膜正中间并均匀覆盖制备柱膜表面。洗脱液预热到65℃，加入制备柱膜上室温放置2-5分钟，可提高洗脱效率。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA A260/A280比值异常，可能的原因分析及改善建议？
· 若A260/A280偏低，考虑可能有蛋白质，酚类或其他在280nm处有较强吸收峰的物质；建议调整样本用量，确保抽提过程中，样本被充分裂解。
· 若A260/A280偏高，考虑可能有RNA污染；建议确保抽提过程中按试剂盒protocol使用RNA酶，确保使用的RNA酶没有因过期或存放不当导致活性降低或失效。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA有降解，可能的原因分析及改善建议？
· 抽提基因组DNA所用材料保存不当或反复冻融，导致基因组DNA破坏或部分降解；建议尽量选择新鲜材料，不能马上处理的样本应及按照相关SOP低温保存和运输，避免反复冻融。
· 内源性核酸酶引起基因组DNA被降解；建议研磨过程中补充液氮，裂解液中加入核酸酶抑制剂。
· 操作过于激烈，导致DNA被机械损伤；建议在混合及裂解过程中，避免长时间过度激烈操作。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提到的DNA酶反应效果不好，可能的原因分析及改善建议？
· DNA纯度偏低，请参考A260/A280值异常的改善建议。
· DNA中含有盐分，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次或适当增加洗涤次数，最后一次buffer W2洗涤时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
⚑ Axygen柱法通用型基因组DNA及细菌基因组DNA抽提试剂盒，抽提过程中，制备膜孔被堵住，可能的原因分析及改善建议？
· 样本过多，建议减少样本用量；
· 样本裂解研磨不充分，确保样本充分研磨和裂解。
为了更有效地帮助大家了解我们的产品、改善产品选择流程，同时解决可能出现的问题，我们技术部小姐姐特地针对咨询和疑问较多的产品，整理了一系列常见问题解答(FAQ)
传送门：
1. 快速了解如何选择/使用微孔板
2. 快速了解细胞培养耗材常见问题
3. Matrigel使用常见问题
4. 血清和其他细胞培养试剂常见问题
5. Transwell及Insert小室产品选择常见问题
6. 细胞迁移与侵袭实验常见问题
7. Axygen Biokit常见问题（上）
8. Axygen Biokit 常见问题（下）
9. Axygen 耗材常见问题
10. Axygen PCR耗材及密封产品常见问题
11. 移液管产品常见问题
12. 培养基选择及常见问题