⚑ Axygen柱法通用型RNA抽提试剂盒回收到的RNA量少，可能的原因及改善建议？ 
· 样本用量过多或过少，样本用量过多导致裂解不完全，样本用量过少不能获得足量RNA；建议按照试剂盒protocol并依据样本实际情况调整样本用量。
· 样本中RNA丰度低，不同样本中RNA丰度不同，一般肝脏，胰腺，心脏中RNA含量较高（2-4ug/mg）；脑，胚胎，肾，肺，胸腺，卵巢等是RNA中等丰度组织（0.05-2ug/mg）；膀胱，骨和脂肪组织中RNA含量偏低（＜0.05ug/mg）。

⚑ Axygen柱法通用型RNA抽提试剂盒回收到的RNA发生降解，可能的原因及改善建议？
· 样本不新鲜或保存不当；尽量选择新鲜样本，若需要保存，建议新鲜样本用液氮迅速冷却后保存于-80℃。
· 内源RNA酶降解，抽提时样本使用量过多，匀浆过程引起温度过高。某些富含内源核酸酶的组织（如肝脏，胸腺等）在液氮环境中进行组织研磨比匀浆更有助于减少RNA酶引起的RNA降解。
· 外源RNA酶降解，确保环境及使用的耗材等不会引入RNA酶污染。
· 裂解液用量不足，裂解样本时，请确保裂解液完全浸没样本。

⚑ Axygen柱法通用型RNA抽提试剂盒，抽提RNA的A260/A280比值偏低，可能的原因分析及改善建议 ？
考虑可能有蛋白质，酚类或其他在280nm 处有较强吸收峰的物质；建议加入R-II并离心后，避免把沉淀转移到制备柱上，多糖或多酚含量丰富的组织，注意多糖或多酚的去除。确保buffer W1A和W2中加入相应体积的乙醇（95%或100%）。

⚑ Axygen柱法通用型RNA抽提试剂盒，抽提RNA中有基因组DNA污染，可能的原因分析及改善建议？
·  样本用量过多，超出buffer R-II的裂解处理范围，建议调整样本用量。
· 样本含有机溶剂（如DMSO，乙醇等），建议先去除这些有机溶剂，避免影响裂解液的功能。
· 裂解后取上清，避免吸到沉淀。

⚑ Axygen柱法血RNA抽提试剂盒，回收到的RNA量偏少，可能的原因分析及改善建议？
· 避免血用量过多或过少，太多会出现裂解不充分，太少会导致RNA量不足。
· 裂解后取上清时，避免吸到沉淀。
· 把洗脱液预热到65℃有助于提高洗脱效率。

⚑ Axygen柱法血RNA抽提试剂盒，使用过程中，出现红细胞没有被完全裂解，应如何处理？
· 第2步，冰浴后悬液没有变得澄清，建议延长冰上孵育时间至20分钟。
· 第3步，离心后沉淀仍为红色，建议第4步加入buffer RL 后再增加冰上孵育时间5-10分钟。

⚑ Axygen柱法血RNA抽提试剂盒，抽提RNA的A260/280比值偏低，可能的原因及改善建议？
考虑可能有蛋白质或其他在280nm 处有较强吸收峰的物质；建议加入R-II中和离心后，避免把沉淀转移到制备柱。确保buffer W1A和W2中加入相应体积的乙醇（95%或100%）。

⚑ Axygen柱法胶回收试剂盒，目的片段回收效率低，可能的原因及改善建议是？


⚑ Axygen柱法胶回收试剂盒，回收DNA片段用于酶切，效果不好，原因分析及改善建议？ 
· 回收的DNA片段中含有盐分，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次，最后一次buffer W2清洗时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
· 琼脂糖残留，建议切胶时尽可能去掉不含目的片段的胶，确保胶在DE-A中充分熔化。洗脱产物中含有ssDNA；建议把洗脱产物95℃加热2分钟，然后冷却到室温后使用，使单链DNA退火。

⚑ Axygen柱法PCR清洁试剂盒，片段回收效率低，可能的原因及改善建议是？


⚑ Axygen柱法PCR清洁试剂盒，回收片段用于下游实验效果不好，原因分析及改善建议？
· 抽提的DNA片段中含有盐分，乙醇污染；建议确保bufferW2洗两次或适当增加洗涤次数，最后一次buffer W2清洗时，离心时间由1分钟延长至2分钟。
· 洗脱产物中含有引物二聚体，会影响后续实验，如影响测序结果。正常情况下，使用该试剂盒无法完全去除>40 bp的引物二聚体；建议在PCR和制备柱结合后，先用750ul 35% 盐酸胍（guanidinehydrochloride ，35 g in 100 ml DI water)洗涤，然后按照试剂盒protocol，进行后续洗涤和洗脱。
· 洗脱产物中含有ssDNA；建议把洗脱产物95℃加热2分钟，然后冷却到室温后使用，使单链DNA退火。

⚑ Axygen柱法体液病毒DNA/RNA抽提试剂盒回收到的病毒DNA/RNA量少，可能的原因及改善建议？
· 确保试剂盒按照要求保存且在效期内。
· DNA/RNA降解；建议确保样本合理保存且没有反复冻融，确保抽提过程中的无酶环境，抽提的DNA/RNA应尽快使用或合理保存，避免长时间在室温放置引起的降解。
· 蛋白酶K失效或消化不全；建议按照试剂盒protocol使用蛋白酶K，避免反复冻融。
· DNA/RNA在洗涤过程中被带走或未能有效被洗脱掉；建议确保洗涤液bufferW2中加入相应体积无水乙醇，确保使用正确的洗脱液，加入制备柱膜正中间并确保均匀覆盖膜。洗脱液预热，加入制备柱后室温静置5分钟后再离心或抽负压可提高洗脱效率。

⚑ Axygen柱法体液病毒DNA/RNA抽提试剂盒回收到的病毒DNA/RNA，PCR/RT PCR结果异常，可能的原因及改善建议？
· PCR/RT PCR条带扩增不出，可能是抽提到的DNA/RNA量偏少，建议参考上一条“回收到的病毒DNA/RNA量少”；可能是病毒滴度低，建议适当增加病毒液用量；引物，温度等PCR参数设置异常，建议设置阳性对照以便于查找原因。
· PCR/RT PCR条带扩增出多条带或条带位置不对，考虑操作过程中塑料耗材带来的污染，设置阴性对照以便于查找原因。

为了更有效地帮助大家了解我们的产品、改善产品选择流程，同时解决可能出现的问题，我们技术部小姐姐特地针对咨询和疑问较多的产品，整理了一系列常见问题解答(FAQ)
传送门：
1. 快速了解如何选择/使用微孔板
2. 快速了解细胞培养耗材常见问题
3. Matrigel使用常见问题
4. 血清和其他细胞培养试剂常见问题
5. Transwell及Insert小室产品选择常见问题
6. 细胞迁移与侵袭实验常见问题
7. Axygen Biokit常见问题（上）
8. Axygen Biokit 常见问题（下）
9. Axygen 耗材常见问题
10. Axygen PCR耗材及密封产品常见问题
11. 移液管产品常见问题
12. 培养基选择及常见问题