若发现细胞停止生长或培养细胞不贴壁，往往会让实验人员感到无比沮丧。细胞生长迟缓和培养物性状不稳定会造成项目延期，令团队士气受挫，因此，研究人员不得不想方设法找出问题的根源并加以解决。这些问题有时无法直截了当地给出解决方案。细胞培养技术十分复杂，需要花时间分解过程并排查问题。最常见的问题通常包括生长模式异常或细胞贴壁呈点状、不均匀或不稳定。其它问题包括生长速度缓慢或突然变化，或者出现无法解释的结果。上述问题往往与培养方法、孵育和培养基有关。今天小C就和您聊聊其中的一些痛点，以及如何通过遵循规范操作防患于未然。
 

01. 检查所用方法

当细胞培养物出现问题时，首先需要评估的是操作方法。例如，饲养培养物时可能会使其受到污染，这是一个严重却常见的问题。混合和移液不当也会带来问题：

• 细胞接种液不均匀或混合不充分会产生泡沫或气泡，从而阻碍细胞生长和贴壁，并在容器上留下斑点。小心倾倒或吹打培养基，确保不产生气泡。

• 静电会破坏塑料容器上的细胞贴壁效果，尤其是在低湿度区域。拆除包装时，尽量不要将容器与包装摩擦。擦拭容器外部或使用防静电装置也有助于防止静电。

• 滚瓶的转速会导致细胞生长过密或聚集成团。将起始速度设置为每分钟半圈到每分钟一圈之间，并根据需要进行调整。保持滚瓶清洁，防止打滑或卡顿。

 

当观察到细胞贴壁或生长不均匀或模式异常时，通常意味着有地方出了问题。为了更好地进行检测，可使用乙醇固定培养物样本，然后再进行染色并观察。

 02. 孵育问题
尽管使用培养箱的目的是为了降低环境因素的影响 (如温度变化)，但仍有许多变量会影响生长速率和培养物的活性：

• 实验过程中反复开关培养箱会造成温度变化；容器叠放的方式和位置也会引起温度变化。非必要时不得打开培养箱，并将重要的培养物放在后面。也要考虑培养皿叠放位置的影响；最下层的培养皿最靠近金属架，因此加热更快。

• 蒸发会影响细胞生长速度和模式；将储水箱加满水，用气体洗瓶加湿进入培养箱的气体，以便降低蒸发的影响。

• 振动会导致细胞生长异常，如细胞呈同心圆环状。培养箱内的风扇电机松动会引起振动，人员走动或电动设备也可能引起振动。将培养箱放置在坚固的表面上，确保同一表面上的其它设备不会振动。

 

此外，还应采取其它环境预防措施，以确保细胞正常生长，如使培养箱保持在水平状态、不含有毒杂质等。

 03. 培养基问题 培养基的问题有时并非显而易见，许多因素都会影响培养基的功能，如试剂质量不佳、缓冲液不足和过滤不充分，甚至是荧光毒性。

除了确保使用适合研究的配方并购买优质产品外，检测培养基功能的最佳方式就是进行实验。将有问题的培养基与另一家生产商的同一种培养基进行比较。如果使用新培养基也产生同样结果，则可能是方法或孵育问题。

 04. 以科学的态度对待问题
采用不恰当的技术和处理方法会影响活细胞培养。尽管逐个排查变量十分耗时费事，但往往能够更好地发现问题并找出原因。

当细胞出现异常生长时，不妨把它们当成其他科研难题来攻克：大胆假设、小心检验并分析。用不了多久，您就能掌握让宝贵的细胞健康生长的诀窍，研究工作也会自此步入正轨。