康宁可溶性微载体结合生物反应器及无血清培养基：解锁MSC规模化悬浮扩增方案

• 生物反应器：艾贝泰 Applitech AbioBundle eDual 1L

• 培养基：Innocellular MesenPlify xSF

• 微载体：Corning可溶性微载体 Synthemax II包被（Synthemax DMC，货号：7290）

• 种子细胞：脐带来源 MSC，P6

1. 采用间歇式搅拌方式促进细胞贴壁，半换液及灌流模式相结合进行细胞扩增培养。MSC培养5天细胞增殖16.5倍，细胞收获密度1.65×10⁶cells/mL。

2. 细胞表型验证，显示扩增后的 MSC 表型未发生偏离，表面标志物符合ISCT 标准：CD73⁺/CD90⁺/CD105⁺≥95%，CD14⁻/CD34⁻/CD45⁻≤2%。

3. 代谢指标变化与细胞生长的关联性分析

• Gluc（葡萄糖）：与细胞密度负相关（R²=0.82），适应期消耗慢（D0→D2-8AM 降至 0.13g/L），对数期消耗加快，可将 Gluc＜0.2g/L 作为补料触发信号。
• Lac（乳酸）：呈“先升后稳再升”趋势：D2-8AM达0.94g/L（适应期积累），半换液 + 灌流后降至0.64g/L（有氧代谢增强）。
• NH4+（氨离子）：始终在1.88-2.68mmol/L（低于毒性阈值），“半换液 + 灌流” 策略可有效清除代谢废物，稳定生长微环境。

4. 细胞倍增数计算（量产效率的核心指标）

• 采用公式：倍增数（n）= log₂（终末细胞密度 / 初始细胞密度），分阶段计算如下：
  
  

• 培养周期内，MSC累计扩增16.5倍，倍增4.05次，平均每天倍增0.81次，高于传统2D培养（0.5-0.6 次 / 天）；
• D2-8AM→D2-8PM（12小时）为最高效率区间，单位时间倍增效率达0.126，即12小时内完成1.51次倍增，此阶段反应器参数可作为规模化生产的最优控制参数，以进一步优化得到更为理想的倍增效率。

1. 康宁Synthemax II 可溶微载体结合无血清培养基在3D生物反应器平台培养MSC细胞可以获取16倍扩增，效率优于2D培养模式，体积放大后可进一步获取高细胞产量。

2. 康宁Synthemax II可溶微载体扩增后的MSC表型未发生偏离，表面标志物符合ISCT标准，细胞活率和代谢指标良好。